ADN recombinante artificial

Se han utilizado varias técnicas recombinantes para la fabricación de proteínas en grandes cantidades y poderlas implementar en el tratamiento de enfermedades. La mayoría de cambios son incluidos a nivel post-traduccional. Así, en el caso del ictus isquémico, se ha diseñando el activador de plasminógeno de

la sangre tPA llamado también alteplasa, que es una molécula que participa en el

proceso de degradación de los coágulos de la sangre.

El proceso industrial involucra la secreción de la enzima (proteasa de la serina) Alteplase al medio 

de cultivo a través de células de Ovario de Hámster Chino (CHO) modificadas genéticamente 

obteniendo con ello una producción y calidad significativa para uso terapéutico, lo cual, apunta a la 

preparación de cultivos de fermentación que sean explotados comercialmente.

Los procesos que deben desarrollarse para obtener una proteína pura  para 

uso farmacéutico son los siguientes

 •  Fermentación 

•  Eliminación de biomasa  

•  Concentración 

•  Purificación  

•  Acabado 

La alteplasa recombinante es una enzima fibrinolítica utilizada para la disolución de los coágulos sanguíneos en los pacientes con  accidente cerebrovascular isquémico agudo. Elaborado mediante tecnología recombinante de ADN, este fármaco que disuelve los coágulos también se denomina activador del plasminógeno tisular recombinante (rt-PA).

http://www.youtube.com/watch?v=9GXTtc-NP48

Webgrafía
http://www.arrakis.es/~ibrabida/vigcorte.html
http://aportes.educ.ar/biologia/nucleo-teorico/influencia-de-las-tic/tecnologia-del-adn-recombinante/que_es_la_tecnologia_del_adn_r.php
http://zl.elsevier.es/es/revista/nursing-20/autoevaluacion-alteplasa-13076895-cuidados-criticos-2005?bd=1

ADN recombinante en la naturaleza

El ADN recombinante que no se obtiene a partir de técnicas moleculares desarrolladas en laboratorios se conoce como RECOMBINACIÓN GENÉTICA, que ocurre de normalmente en la naturaleza, ejemplos de este tipo de recombinación tenemos:

• - recombinación en la reproducción viral
• - recombinación por transformación bacteriana
• - cambio de clase de inmunoglobulinas
• - conversión génica
• - recombinación no homóloga

webgrafía

http://es.scribd.com/doc/70708591/Recombinacion-genetica
http://darwin.usal.es/profesores/pfmg/sefin/MI/tema10MI.html

Técnica de hibridación de las enfermedades cerebrovasculares

·      Hibridación:valora la presencia de fragmentos con una secuencia de nucleótidos concreta. Incluye las técnicas de Southern blot (ADN), Northern blot (ARN).

Procedimiento experimental

1.    La hélice de doble cadena (ADN) se separa mediante un proceso físico (calor) o químico (con una base fuerte, como la sosa cáustica). Esto rompe los enlaces por puente de hidrógeno que mantienen unidas las dos hebras del ADN.

2.    Las dos hebras complementarias se separan, el ADN se desnaturaliza.

3.    Una muestra de cadenas simples (o desnaturalizadas) se mezcla con otra muestra de cadenas simples.

4.    La muestra combinada se enfría lentamente, las moléculas sencillas se van emparejando por las zonas complementarias (más establestermodinámicamente) y se va formando una nueva molécula hibridada

La velocidad de hibridación es un indicativo de la similaridad genética entre las dos muestras. El porcentaje de similaridad genómica y la velocidad de hibridación es directamente proporcional.

Webgrafía

http://www.neurowikia.es/content/diagn%C3%B3stico-anatomopatol%C3%B3gico-y-t%C3%A9cnicas-de-biolog%C3%AD-molecular-en-tumores-primarios-del-sn

http://www.cnic.es/doc/otri/catalogo_capacidades_es.pdf

PCR en enfermedades cerebovasculares

Proteína C-reactiva (PCR) es la más conocida entre las proteínas de fase aguda, un grupo de proteínas cuya concentración aumenta en la sangre como respuesta a las enfermedades inflamatorias. El hígado produce esta proteína en respuesta a la infección, lesión de los tejidos y la inflamación.Un número creciente de estudios han examinado que una prueba más sensible, el llamado PCR-us (PCR de alta sensibilidad) puede predecir brotes de la enfermedad cardiovascular, accidente cerebrovascular y muerte en diferentes entornos. Los altos niveles de PCR-us consistentemente predecir eventos coronarios recurrentes en pacientes con angina inestable e infarto agudo de miocardio.
Rango de medición
Ensayo Inmunoturbidimétrico: 

Suero / Plasma: 0,25-40mg / l, CV <6,0%
De sangre entera: 0,50-40mg / l, CV <9,0%

Principio:

Determinación cinética de la concentración de CRP en la medición fotométrica a 546 nm y 700 nm de la reacción antígeno-anticuerpo entre anticuerpos humanos CRP unido a partículas de poliestireno y la PCR en la muestra.

Duración de la prueba:

Duración de la prueba dura aprox. 3 minutos de medición en suero, aproximadamente. 4 minutos la medición de la sangre entera.

Tipos:

Con respecto a los análisis para cuantificar los niveles de PCR, en la actualidad existen dos tipos de exámenes: 
1) La prueba estándar, la cual mide en un rango más amplio los niveles de PCR en la sangre, pero que pierde sensibilidad con niveles bajos de la proteína
2) La prueba denominada PCR ultrasensible, la cual mide con mayor precisión los valores bajos de PCR y es mucho más sensible. De esta manera, con el examen de PCR estándar es posible el diagnóstico de estados de inflamación pronunciados con patologías ya establecidas (sólo reporta valores de PCR mayores a 3mg/L), mientras que gracias a la sensibilidad y precisión del examen de PCR ultrasensible (reporta niveles tan bajos como hasta de 0.1mg/L) puede predecirse el riesgo que tiene una persona sana a padecer enfermedades que involucren inflamación

Los resultados de PCR ultrasensible pueden ser categorizados de acuerdo al riesgo de enfermedades cardiovasculares en:

• Personas con riesgo bajo: < 1mg/L.
• Personas con riesgo intermedio: entre 1mg/L y 3mg/L.
• Personas con riesgo alto: > 3mg/L

Webgrafía:

http://o.elobot.es/descubrir-riesgos-ocultos-del-corazon/proporcionando-mayor-claridad-a-las-pruebas-de-pcr

http://roewebnews.com/tag/pcr-ultrasensible/