Diagnóstico de leptospirosis mediante la PCR en pacientes con síndrome febril ictorohemorrágico

La leptospirosis (enfermedad de Weil oictericia de Weill ) es una enfermedad febril producida por la Leptospira interrogans, una bacteria del orden Spirochaetales, de la familia Leptospiraceae.
Los principales síntomas en la mayoría de los casos sonfiebre, cefalea, dolores musculares, articulares y óseos, ictericia, insuficiencia renal, hemorragias y afectación de las meninges. 
Existen diferentes métodos de diagnóstico como: la MAT que se emplea para diagnosticas anticuerpos leprospira en el suero pero con el pasar del tiempo se desarrollaron mas pruebas, el ensayo ELISA, el Dispstick y el Dri Dot.

Materiales y Métodos:
25 cepas patógenas y no patógenas de referencia internacional, cedidas por el Rpyal Tropical Institute de Holanda, se subcultivaron a 30ºC en medio EMJH AL 10%.

Muestras de pacientes:
Se recolectaron muestras de suero y orina de 73 pacientes provenientes de diferentes regiones de Venezuela, a los cuales se les realizó el diagnóstico diferencial entre patologías como manifestaciones clínicas compatibles con los SFIH

Extracción de ADN:

1.- Lisis: Centrifugación a 12000 rpm y lavados con PBS, mezcla con buffer de lisis y se incubó a 56ºC durante 2h.
2.- Separación: Fenol-cloroformo-alcohol isoamílico .
3.- Purificación: se resuspendió en buffer TE ( 10 mM Tris-HCL ph 7.5 , 1 mM EDTA) se almacenó a 4ºC hasta el momento del uso.
4.-Análisis: Se evaluó mediante procedimientos convencionales usando tablas de 2x2 considerando la MAT como prueba de referencia con un resultado de PCR positivo en orina y/o suero considerados como verdaderos positivos.

Bibliografía:
Cardona Noelia, Moros María Rosalba, López Eneida A, Pérez José Luis, Hernández Carlos Roberto, "Diagnóstico de leptospirosos mediante la PCR en pacientes con síndrome icterohemorrágico" Instituto Nacional de Higiene " Rafael Rangel", Caracas-Venezuela, 25 de enero del 2008

Webgrafía:
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/001376.htm
http://es.wikipedia.org/wiki/Leptospirosis
http://epi.minsal.cl/epi/html/enfer/leptospirosis.html